植物超氧化物歧化酶(SOD)ELISA檢測試劑盒使用說明書

檢測原理
試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗（ELISA）。往預先包被超氧化物歧化酶（SOD）抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的超氧化物歧化酶（SOD）呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品活性。

樣品收集、處理及保存方法
1.  樣本不能含疊氮鈉（NaN3），因為疊氮鈉（NaN3）是辣根過氧化物酶（HRP）的抑制劑。
2.  標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行。
3.  植物萃取液或其它相關樣本：請1000 x g離心20分鐘，取上清即可檢測。
4.  保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

自備物品
1.    酶標儀（450nm）
2.    加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3.    37℃恒溫箱

操作注意事項
試劑盒保存在2-8℃，使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結晶，這屬于正常現象，水浴加熱使結晶完全溶解后再使用。
實驗中不用的板條應立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。
濃度為0的S0號標準品即可視為陰性對照或者空白；按照說明書操作時樣本已經稀釋5倍，終結果乘以5才是樣本實際濃度。
嚴格按照說明書中標明的時間、加液量及順序進行溫育操作。
所有液體組分使用前充分搖勻。

試劑盒組成
名稱    96孔配置    48孔配置    備注    
微孔酶標板    12孔×8條    12孔×4條    無    
標準品    0.3mL*6管    0.3mL*6管    無    
樣本稀釋液    6mL    3mL    無    
檢測抗體-HRP    10mL    5mL    無    
20×洗滌緩沖液    25mL    15mL    按說明書進行稀釋    
底物A    6mL    3mL    無    
底物B    6mL    3mL    無    
終止液    6mL    3mL    無    
封板膜    2張    2張    無    
說明書    1份    1份    無    
自封袋    1個    1個    無    
注：標準品（S0-S5）濃度依次為：0、12.5、25、50、100、200 U/mL

試劑的準備
20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。

洗板方法
手工洗板：甩盡孔內液體，每孔加滿洗滌液，靜置1min后甩盡孔內液體，在吸水紙上拍干，如此洗板5次。
自動洗板機：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。

操作步驟
1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2.設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；
3.樣本孔先加待測樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL；空白孔不加。
4.除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5.棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）。
6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7.每孔加入終止液50μL，15min內，在450nm波長處測定各孔的OD值。

結果判斷
繪制標準曲線：在Excel工作表中，以標準品濃度作橫坐標，對應OD值作縱坐標，繪制出標準品線性回歸曲線，按曲線方程計算各樣本濃度值。


試劑盒性能
準確性：標準品線性回歸與預期濃度相關系數R值，大于等于0.9900。
靈敏度：低檢測濃度小于1.0U/mL。
特異性：不與其它可溶性結構類似物交叉反應。
重復性：板內、板間變異系數均小于15%。
貯藏：2-8℃，避光防潮保存。
有效期：6個月

免責聲明
1.試劑盒僅供研究使用，不得用于臨床實驗或人體實驗，否則所產生的一切后果，由實驗者承擔，本公司概不負責。
2.嚴格按照說明書操作，實驗者違反說明書操作，后果由實驗者承擔。