人可溶性凋亡相關因子（sFAS/Apo-1）ELISA試劑盒  本試劑盒僅供研究使用。

  檢測范圍： 48T 25 ng/L -800 ng/L

  使用目的：

  本試劑盒用于測定人血清、血漿及相關液體樣本可溶性凋亡相關因子（sFAS/Apo-1）含量。

  實驗原理

  本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人可溶性凋亡相關因子（sFAS/Apo-1）水平。用純化的人可溶性凋亡相關因子（sFAS/Apo-1）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入可溶性凋亡相關因子（sFAS/Apo-1），再與HRP標記的可溶性凋亡相關因子（sFAS/Apo-1）抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的可溶性凋亡相關因子（sFAS/Apo-1）呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中人可溶性凋亡相關因子（sFAS/Apo-1）濃度。

  標本要求

  1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融

  2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

  操作步驟

  1. 標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照說明書中所示在小試管中進行稀釋。

  2. 加 樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣 品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

  3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

  4. 配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用

  5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。

  6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。

  7. 溫育：操作同3。

  8.洗滌：操作同5。

  9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.

  10.終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。

  11.測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

  注意事項：

  1．試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。

  2．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。

  3．各步加樣均應使用加樣器，并經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。

  4． 請每次測定的同時做標準曲線，做復孔。如標本中待測物質含量過高（樣本OD值大于標準品孔孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n倍）后再測定，計算時請后乘以總稀釋倍數（×n×5）。

  5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

  6．底物請避光保存。

  7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.

  8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

  9．本試劑不同批號組分不得混用。

  10. 如與英文說明書有異，以英文說明書為準。

  保存條件及有效期

  1．試劑盒保存：；2-8℃。

  2．有效期：6個月