對于ELISA實(shí)驗(yàn)中常見問題及解決方法收集標(biāo)本前必須清楚要檢測的成份是否

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對于ELISA實(shí)驗(yàn)中常見問題及解決方法

 

收集標(biāo)本前必須清楚要檢測的成份是否足夠穩(wěn)定。對收集后當(dāng)天進(jìn)行檢測的標(biāo)本，儲存在 4 ℃ 備用，如有特殊 原因需要周期收集標(biāo)本，
將標(biāo)本及時分裝后放在 -20 ℃ 或 -70 ℃ 條件下保存。避免反復(fù)凍融。標(biāo)本 2 -8 ℃ 可保存 48 小時， -20 ℃ 可保存 1 個月。 -70 度可保存 6 個月。部分激素類標(biāo)本需添加抑肽酶。

1、 液體類標(biāo)本：
標(biāo)本必須為液體，不含沉淀。包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等。 1ml 的 全血可得到 0.5ml 的血清
或血漿。每個標(biāo)本量收集體積＝ 100ul × 檢測種類。取材前須向銷售人員索要說明書。

2、 血清：
室溫血液自然凝固 10-20 分鐘后，離心 20 分鐘左右( 2000-3000 轉(zhuǎn) / 分)。收集上清。如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

◇ 血漿：
應(yīng)根據(jù)試劑盒的要求選擇 EDTA 、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，加入 10 ％( v/v )抗凝劑 ( 0.1M 檸檬酸鈉或 1% heparin 或 2.0%EDTA.Na2) 混合
10-20 分鐘后，離心 20 分鐘左右( 2000-3000 轉(zhuǎn) / 分)。仔細(xì)收集上清。如有沉淀形 成，應(yīng)再次離心。

◇ 尿液、胸腹水、腦脊液：
用無菌管收集。離心 20 分鐘左右( 2000-3000 轉(zhuǎn) / 分)。仔細(xì)收集上清。如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

◇ 細(xì)胞培養(yǎng)上清：
檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心 20 分鐘左右( 2000-3000 轉(zhuǎn) / 分)。仔細(xì)收集上清。檢測細(xì)胞內(nèi)的 成份時，用 PBS ( PH7.2
-7.4 )稀 釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到 100 萬 /ml 左右。通過反復(fù)凍融，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心 20 分鐘左右( 2000-3000 轉(zhuǎn) / 分)仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

◇ 組織標(biāo)本：
切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的 PBS ，緩沖液中可加入 1 μ g/L 蛋白酶抑制劑或 50U/ml 的 Aprotinin ( 抑肽酶)。用手工或勻漿
器將標(biāo)本勻漿充分。離心 20 分鐘左右( 2000-3000 轉(zhuǎn) / 分)。仔細(xì)收集上清置于 -20 度或 - 70 度保存，如有必要，可以將樣品濃縮干燥。 分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。

 

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