小鼠MCP-1檢測試劑盒

睿信生物科技有限公司是集研發(fā)、生產(chǎn)、銷售、客戶服務(wù)為一體的生物技術(shù)公司，全力打造高品質(zhì)生物試劑產(chǎn)品鏈和技術(shù)服務(wù)鏈。目前，已建立ELISA科研試劑盒，動物疫病與食品安全檢測試劑盒，標(biāo)準(zhǔn)品與質(zhì)控品，血清，抗體等生物科研用品的一站式服務(wù)平臺。自成立之初，泉州睿信生物科技有限公司就認(rèn)識到產(chǎn)品質(zhì)量是企業(yè)高速成長的生命線。為此，在每一類產(chǎn)品的生產(chǎn)過程中，逐步建立起有針對性的、標(biāo)準(zhǔn)嚴(yán)格的生產(chǎn)工藝與質(zhì)控體系，確保產(chǎn)品的規(guī)模化生產(chǎn)與質(zhì)量穩(wěn)定。同時(shí)，根據(jù)市場的需求，不斷地進(jìn)行產(chǎn)品改進(jìn)與新產(chǎn)品研發(fā)，緊跟現(xiàn)代生物學(xué)研究與應(yīng)用的前進(jìn)步伐！致力于每位客戶的滿意和成功，為客戶提供最有競爭力的產(chǎn)品和解決方案，持續(xù)為客戶創(chuàng)造最大價(jià)值是泉州睿信生物科技有限公司一貫秉承的信念；立志成為國內(nèi)有一定影響力的中國生物技術(shù)公司是我們的終極追求目標(biāo)。

小鼠MCP-1檢測試劑盒

需要轉(zhuǎn)化生長因子β3檢測詳細(xì)說明書請與客服聯(lián)系！

泉州睿信生物核心專長：

生物藥物分析方法開發(fā)

分析方法驗(yàn)證

RIP技術(shù)（RNA Binding Protein Immunoprecipitation，RNA 結(jié)合蛋白免疫沉淀），是研究細(xì)胞內(nèi)RNA與蛋白結(jié)合情況的技術(shù)。分析與目的蛋白結(jié)合的 RNA.運(yùn)用針對目標(biāo)蛋白的抗體把相應(yīng)的RNA-蛋白復(fù)合物沉淀下來，然后經(jīng)過分離純化就可以對結(jié)合在復(fù)合物上的 RNA 進(jìn)行分析；即用抗體或表位標(biāo)記物捕獲細(xì)胞核內(nèi)或細(xì)胞質(zhì)中內(nèi)源性的RNA結(jié)合蛋白，防止非特異性的 RNA的結(jié)合，免疫沉淀把RNA結(jié)合蛋白及其結(jié)合的RNA一起分離出來，結(jié)合的 RNA 序列可通過 microarray（RIP-Chip），定量RT-PCR 或 高通量測序（RIP-Seq）方法來鑒定。是了解轉(zhuǎn)錄后調(diào)控網(wǎng)絡(luò)動態(tài)過程的有力工具，能幫助我們發(fā)現(xiàn) miRNA 的調(diào)節(jié)靶點(diǎn)。

RIP 實(shí)驗(yàn)流程

（一）. 細(xì)胞裂解液獲取

A. 單層細(xì)胞或者貼壁細(xì)胞處理

1.冷 PBS 清洗培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶中的細(xì)胞兩次

2.加入冷 PBS 后用細(xì)胞刮將細(xì)胞刮下來，收集至 enpendoff管

3.1500rpm，4℃離心 5min，棄上清，收集細(xì)胞

4.用與細(xì)胞等體積的RIP裂解液重懸細(xì)胞，吹打均勻后于冰上靜置5min

5.每管分裝200ul細(xì)胞裂解液，貯存于-80℃

B.懸浮細(xì)胞處理：先收集細(xì)胞再計(jì)數(shù)，然后清洗裂解

C.組織樣品處理

1.冷 PBS 清洗新鮮切下的組織三次

2.加入冷 PBS 后，用勻漿器或其他細(xì)胞分離設(shè)備使組織分散為單個(gè)細(xì)胞，計(jì)數(shù)

3.1500rpm，4℃離心5min棄上清，收集細(xì)胞

4用與細(xì)胞等體積的 RIP 裂解液重懸細(xì)胞，吹打均勻后置于冰上靜置5min

5. 每管分裝 200ul 細(xì)胞裂解液，貯存于-80℃

（二）. 磁珠的準(zhǔn)備

A.實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備

1、enpendoff 管

2、磁力架

3、冰盒， RIP Wash Buffer 置于冰上

4、抗體，置于冰上

5、渦旋震蕩器

6、槍、槍頭放于超凈臺照射30min，槍噴DEPC水

B. 磁珠準(zhǔn)備過程

1. 重懸磁珠

2. 標(biāo)記實(shí)驗(yàn)所需的enpendoff管，樣品包括目的樣品，陰性對照與陽性對照

3. 吸取 50ul 重懸后的磁珠懸液于每個(gè) enpendoff 管

4. 每管加入 500ul RIP Wash Buffer，渦旋震蕩

5.將 enpendoff 管置于磁力架上，并左右轉(zhuǎn)動 15°使磁珠吸附成一條直線，去上清，重復(fù)一 次

6.用 100ul 的 RIP Wash Buffer 重懸磁珠，加入約 5ug 相應(yīng)抗體于每個(gè)樣品中

7. 室溫孵育 30min

8. 將 enpendoff 管置于磁力架上，棄上清

9. 加入 500ul RIP Wash Buffer，渦旋震蕩后棄上清，重復(fù)一次

10. 加入 500ul RIP Wash Buffer，渦旋震蕩后置于冰上

（三）. RNA 結(jié)合蛋白免疫沉淀

A. 準(zhǔn)備工作

1、冰盒

2、360°旋轉(zhuǎn)儀

3、RIP Wash Buffer 、0.5M EDTA 、RNase Inhibitor 置于冰上 B. RNA 結(jié)合蛋白免疫沉淀實(shí)驗(yàn)過程

1.準(zhǔn)備 RIP Immunoprecipitation Buffer

2.將前上步的 enpendoff 管放磁力架上，去上清，每管加入 900ul RIP Immunoprecipitation Buffer

3. 迅速解凍一步制備的細(xì)胞裂解液，14,000rpm，4℃離心 10min。吸取 100ul 上清液于 上一步的磁珠-抗體復(fù)合物中，使得總體積為 1ml

4. 4℃孵育 3h 至過夜

5. 短暫離心，將 enpendoff 管放在磁力架上，棄上清

6. 加入 500ul RIP Wash Buffer，渦旋震蕩后將 enpendoff 管放在磁力架上，棄上清，重復(fù) 清洗 6 次

（四）. RNA 純化

A. 實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備

1.槍、槍頭、enpendoff 管紫外照射 30min，噴DEPC水以除RNA 酶

2. Salt SolutionⅠ、Salt SolutionⅡ、RIP Wash Buffer、Proteinase K、10%SDS、Precipitate Enhancer 置于冰上

3.RNase-free 的乙醇、異戊醇

4.DEPC 水置于冰上

5. 離心機(jī)預(yù)冷

6. 冰盒

B. RNA 純化過程

1.準(zhǔn)備 Proteinase K Buffer。每個(gè)樣品需 150ul

2.用 150ul Proteinase K Buffer 重懸上述磁珠-抗體復(fù)合物

3.55℃孵育30min

4.孵育完之后，將 enpendoff 管置于磁力架上，將上清液吸入一新的 enpendoff 管中

5.于每管上清液中加入250ulRIP Wash Buffer

6.于每管加入400ul苯酚：異戊醇，渦旋震蕩15s，室溫下14,000rpm離心10min

7.小心的吸取350ul上層水相，吸入另一新的 enpendoff 管

8.于每管加入400ul，渦旋震蕩 15s，室溫下 14,000rpm 離心 10min

9.小心的吸取300ul上層水相，吸入另一新的 enpendoff 管

10.每管加入 50ul Salt SolutionⅠ，15ul Salt SolutionⅡ,5ul Precipitate Enhancer ，850ul 無水乙醇(無 RNase)，混合，-80℃保持1h至過夜

11.14,000rpm，4℃離心 30min，小心去上清

12.用 80%乙醇沖洗一次，14,000rpm，4℃離心 15min，小心去上清，空氣中晾干.

13.10-20ulDEPC水溶解，-80℃保存，送測序或進(jìn)行下游實(shí)驗(yàn)。

 小鼠MCP-1檢測試劑盒

 

 

服務(wù)目的：

測定兩種目的蛋白質(zhì)是否在細(xì)胞內(nèi)結(jié)合；也可用于測定確定某種特定蛋白質(zhì)的新的作用 搭檔。

服務(wù)原理：

以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎(chǔ)的用于研究蛋白質(zhì)相互作用的經(jīng)典方法，當(dāng)細(xì)胞 在非變性條件下被裂解時(shí)，完整細(xì)胞內(nèi)存在的許多蛋白質(zhì)－蛋白質(zhì)間的相互作用被保留 了下來。如果用蛋白質(zhì) x 的抗體免疫沉淀 x，那么與 x 在體內(nèi)結(jié)合的蛋白質(zhì) y 也能沉淀 下來。 服務(wù)材料：

試劑：蛋白提取試劑盒、非離子變性劑（NP-40、TritonX-100）、PBS、TBS、相應(yīng)的 IgG、Protein A 或 Protein G 瓊脂糖凝膠珠、SDS-PAGE 電泳、上樣緩沖液。

儀器：振蕩器、蛋白電泳儀、恒溫箱、脫色搖床。

服務(wù)流程：

1）用其特定蛋白的抗體與 ProteinA/G 相結(jié)合(Flag IP Kit 已結(jié)合上)；

2）用抗體成點(diǎn)特定蛋白，特定蛋白已結(jié)合了與其相互作用蛋白；

3）通過洗滌得到純復(fù)合蛋白后用感興趣蛋白抗體通過 WB 方法檢測其 IP 結(jié)果；

4）提交 WB 圖與分析結(jié)果和實(shí)驗(yàn)報(bào)告。

服務(wù)方法：

1、蛋白樣品準(zhǔn)備。收集細(xì)胞或組織，在非變性條件下裂解細(xì)胞，釋放蛋白。

2、選做去除非特異性結(jié)合。取待測樣品，選用和免疫共沉淀時(shí)使用的 IgG 種屬相同的 普通 IgG 與瓊脂糖凝膠珠混合，4 oC 慢搖 30min-2h。離心取上清。

3、免疫共沉淀。加一抗，4 oC 慢搖過夜。加瓊脂糖凝膠珠，4 oC 慢搖 1~3h。瞬時(shí)離心 棄上清。PBS 洗沉淀 5 次。

4、加電泳上樣緩沖液，煮沸用于 SDS-PAGE 電泳。

技術(shù)

1、靈敏度高，無內(nèi)源性干擾；

2、檢測范圍寬，大于 7 個(gè)數(shù)量級；

3、檢測速度快，樣品無需孵育等預(yù)處理；

4、操作簡便，可以在同一管內(nèi)完成 2 個(gè)熒光素酶檢測。

服務(wù)內(nèi)容

1、構(gòu)建熒光素酶載體（或客戶自備載體）；

2、細(xì)胞培養(yǎng)與轉(zhuǎn)染；

3、熒光素酶檢測；

4、數(shù)據(jù)分析。

我們提供原始實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)、實(shí)驗(yàn)報(bào)告質(zhì)量保證轉(zhuǎn)染試劑、高靈敏度熒光素酶檢測試劑盒，確保結(jié)果的可靠性

服務(wù)原理：

在細(xì)胞生物學(xué)研究中，有些靶蛋白表達(dá)水平不高，難以用免疫印跡的方法檢測到。 為此可用特異性識別靶蛋白的抗體進(jìn)行免疫沉淀，純化和富集靶抗原。

免疫沉淀是指可溶性抗原與相應(yīng)抗體在電解質(zhì)存在的情況下，按適當(dāng)比例混合而成 可見沉淀物的現(xiàn)象。免疫沉淀技術(shù)是利用抗原蛋白質(zhì)和抗體的特異性結(jié)合或細(xì)菌蛋白質(zhì) 的“protein A”特異性的結(jié)合到免疫球蛋白的 Fc 片段的現(xiàn)象開發(fā)出來的方法。免疫共沉淀是以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎(chǔ)的用于研究蛋白質(zhì)相互作用的經(jīng)典方法。是確定兩種蛋白質(zhì)在完整細(xì)胞內(nèi)生理性相互作用的有效方法。其基本原理是細(xì)胞裂解液 中加入抗體，與抗原形成特異免疫復(fù)合物，經(jīng)過洗脫、收集免疫復(fù)合物，然后進(jìn)行 SDS-PAGE 及 Western blot 分析。

服務(wù)流程：

細(xì)胞或組織裂解---裂解液預(yù)清除---蛋白及抗體反應(yīng)----復(fù)合物及珠子交聯(lián)----蛋白及珠子分離----收集蛋白，WB分析

客戶提供： 1.細(xì)胞或組織。 2.目的蛋白信息。 3.目的蛋白抗體。

交付結(jié)果： 1.免疫沉淀蛋白樣品。 2.WB 電子分析報(bào)告。

產(chǎn)品定義

PRM（平行反應(yīng)監(jiān)視，parallel reaction monitoring）是一種基于高分辨、質(zhì)譜的離子監(jiān)視技術(shù)，能夠?qū)δ繕?biāo)蛋白質(zhì)、目標(biāo)肽段（如發(fā)生翻譯后修飾的肽段）進(jìn)行選擇性檢測，從而實(shí)現(xiàn)對目標(biāo)蛋白質(zhì)/肽段進(jìn)行定量。

技術(shù)原理

PRM技術(shù)基于高分辨、質(zhì)譜（如Orbitrap系列），先利用四級桿質(zhì)量分析器的選擇檢測能力，在一級質(zhì)譜中（Q1）選擇性地檢測目標(biāo)肽段的母離子信息；隨后在collision cell中對母離子進(jìn)行碎裂；后利用高分辨、高質(zhì)量精度分析器在二級質(zhì)譜中檢測所選擇的母離子窗口內(nèi)的所有碎片的信息。這樣即可對復(fù)雜樣本中的目標(biāo)蛋白質(zhì)/肽段進(jìn)行準(zhǔn)確地特異性分析。

相比于傳統(tǒng)的SRM/MRM技術(shù)，PRM技術(shù)將采集二級信息所用的四級桿質(zhì)量分析器替換為更高分辨、更高質(zhì)量精度的分析器，實(shí)現(xiàn)了從目標(biāo)離子對檢測到全部目標(biāo)離子碎片檢測的轉(zhuǎn)化。因此，PRM技術(shù)不僅具有SRM/MRM的靶向定量分析能力，還同時(shí)具備了定性能力。其在定量分析中的還體現(xiàn)在：（1）質(zhì)量精度達(dá)到ppm級，能夠比SRM/MRM更好地排除背景干擾和假陽性，有效提高復(fù)雜背景下的檢測限和靈敏度；（2）對子離子進(jìn)行全掃描，無需選擇離子對和優(yōu)化碎裂能量，更容易進(jìn)行方法學(xué)建立；（3）更寬的線性范圍：增加至5-6個(gè)數(shù)量級。

服務(wù)

通量高：每個(gè)樣本30×以上的數(shù)據(jù)產(chǎn)出量，海量數(shù)據(jù)用于分析

覆蓋度高：能檢測到99%的SNP

分辨率高：單堿基分辨率

檢測范圍廣：可得到更加、可靠的基因變異信息，如somatic snv、indel和somatic  cnv等

數(shù)據(jù)質(zhì)量好：數(shù)據(jù)偏差小、高均一性，真實(shí)反應(yīng)樣本基因組信息

基因組重測序：

對已知基因組進(jìn)行重測序，可進(jìn)行CNV、SNP、染色體結(jié)構(gòu)變異等基因組變異的研究，可以此尋找和疾病，如癌癥等，相關(guān)的生物標(biāo)記。

宏基因組測序：可對某一環(huán)境下的所有微生物進(jìn)行基因組測序，能夠揭示微生物群落多樣性、種群結(jié)構(gòu)、進(jìn)化關(guān)系、功能活性、相互協(xié)作關(guān)系及與環(huán)境之間的關(guān)系。

外顯子組序列捕獲與測序

通過外顯子捕獲技術(shù)獲得外顯子區(qū)域DNA序列進(jìn)行測序，可對各種基因突變進(jìn)行檢測，尋找相關(guān)的致病基因和易感基因。

iTRAQ技術(shù)原理：

iTRAQ試劑為可與氨基酸N端及賴氨酸側(cè)鏈連接的胺標(biāo)記同重元素(isobaric)。在質(zhì)譜圖中，任何一種iTRAQ試劑標(biāo)記的不同樣本中的同一蛋白質(zhì)表現(xiàn)為相同的質(zhì)荷比。

在串聯(lián)質(zhì)譜中，信號離子表現(xiàn)為不同質(zhì)荷比(114～117)的峰，因此，根據(jù)波峰的高度及面積，可以得到蛋白質(zhì)的定量信息。

技術(shù)特點(diǎn):

1．可同時(shí)標(biāo)記2~8 個(gè)樣本。

2. iTRAQ技術(shù)不僅可發(fā)現(xiàn)胞漿蛋白，還有膜蛋白、核蛋白、胞外蛋白。iTRAQ技術(shù)可檢測出低豐度蛋白、強(qiáng)堿性蛋白、小于10KD或大于200KD的蛋白。

3.可標(biāo)記修飾后的氨基酸，因此對磷酸化蛋白等翻譯后修飾蛋白進(jìn)行定性定量研究。

4.報(bào)告離子的相對分子質(zhì)量較低(113~121)，低分子量區(qū)是質(zhì)譜定性(質(zhì)量確定)和定量(豐度比較)較為準(zhǔn)確的區(qū)域，因此質(zhì)譜檢測更為靈敏可靠。

iTRAQ試劑包括三部分：

1. 報(bào)告基團(tuán)（reporter group）：相對分子量為113-121Da（無120），因此iTRAQ試劑可同時(shí)標(biāo)記8組樣品。

2. 平衡基團(tuán)（balance group）：相對分子量為192-184Da (無185)，使得八種iTRAQ試劑分子量均為305 Da，保證標(biāo)記的同一肽段m/z相同。

3. 肽反應(yīng)基團(tuán)：能與肽段N端及賴氨酸側(cè)鏈氨基發(fā)生共價(jià)連接，從而標(biāo)記上肽段拿到蛋白樣品之后，不同組的樣品先分別進(jìn)行等量酶切，每一個(gè)酶切得到的肽段樣品選擇一種標(biāo)記試劑進(jìn)行標(biāo)記反應(yīng)（每一個(gè)肽段至少含有一個(gè)游離的氨基進(jìn)行反應(yīng)）；然后將經(jīng)過不同標(biāo)記的肽段樣品混合后進(jìn)行后續(xù)的質(zhì)譜分析。

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